共聚焦扫描成像显微镜

CSIM 共聚焦扫描成像显微镜是一款以简洁、高效为设计理念开发的共聚焦成像产品，其独有的光路结构和针对单点扫描共聚焦成像开发的转换电路，同时满口了共聚焦成像的高分辨率、高检测灵敏度和宽动态范围的要求。相3D传统设计的共聚焦显微镜，CSIM共聚焦扫描成像显微镜获取的共聚焦图像具有更低的噪声、更黑的背景和更丰富的细节，可为科研人员提供高质量的共聚焦图像。

共聚焦成像(通常特指单光子)是通过一片分光镜将照明针孔和成像针孔共轭实现点照明和点成像，再利用高速光学扫描振镜逐点扫描样品，以获取高分辨率图像的技术。

*光源通常为激光

**通常不设置照明针孔，而是利用激光虚拟照明针孔

因为焦平面的最大强度激发和成像针孔对非焦面信号的过滤，共聚焦成像技术具有出色的光学层切成像能力。

在理想状态下，照明针孔和成像针孔保持严格的百分百共轭，系统可保证最高的焦面信号探测效率和最优的Z轴分辨率。而在实际装机时，器件的精度限制、装配误差和外部因素导致的位移都将破坏照明针孔和成像针孔的共轭关系，导致图像变暗、Z轴分辨率降低。

***当穿过针孔达到探测器的荧光较弱时，通常需要开大针孔漏过更多的非焦面信号，以使图像具有足够的亮度这必然导致图像的Z轴分辨率降低

共聚焦的Z轴分辨率，是运用了最先进的反卷积计算的宽场成像也无法比拟的。尤其是在对荧光强弱差别巨大的厚样品成像时，受限于相机的动态范围，宽场成像系统无法收集足够还原样品原貌的荧光信号，导致反卷积计算结果错误，图像失真。

因为焦平面的最大强度激发和成像针孔对非焦面信号的过滤，共聚焦成像技术具有出色的光学层切成像能力，是运用了最先进的反卷积计算的宽场成像也无法比拟的。尤其是在对荧光强弱差别巨大的厚样品成像时，受限于相机的动态范围，宽场成像系统无法收集足够还原样品原貌的荧光信号，导致反卷积计算结果错误，图像失真。

****对于使用低倍物镜观察薄样品(如贴壁细胞)时，反卷积和共聚焦对比，则相差不大

*****结构照明则是一种介于宽场和共聚焦之间的技术，以较低的成本提供比宽场图像质量更好的清晰图像，但与共聚焦相比仍有差距

******双光子成像显微镜是另一种能提供光学层切成像能力的系统，其特点是:1)使用长波脉冲激光替代短波连续激光激发样品，可以对几百微米厚的样品层切成像;2)只激发焦平面的样品发射荧光，非焦面样品完全不发射荧光，无需针孔过滤非焦面信号;3)更好的光学层切成像性能。判断共聚焦图像质量好坏，除了空间分辨率还有一个重要的依据，即图像位深。图像细节越丰富。位深通常用bit标示，数值越大、

但是，需要注意的是，在共聚焦显微镜里不能简单地把图像位深等同于系统的动态范围--动态范围由硬件决定，是先天因素;图像位深由软件设定，是后天因素。动态范围200:1的原始数据，不管输出的图像是8bit还是16bit，其细节是完全一样的，只有动态范围超过256:1时，16bit才比8bit更能准确地显示实验结果。******动态范围=系统饱和信号强度/系统本底噪声

斑马鱼神经系统，91层Z-stack，40X

斑马鱼鱼卵，67层Z-stack，20X

牛肺动脉内皮细胞，60X